Marzo 11, 2021

Primi risultati sulle caratteristiche qualitative e attività biologica degli estratti di nematociti di Chrysaora Plocamia (CNidary, Sciolto)

lat. Am. J. Aquat. RES., 36 (1): 83-86, 2008
DOI: 10.3856 / VOL36-ISSULLE-FULTUREXT-6

Breve comunicazione

Primi risultati su caratteristiche qualitative e biologiche Attività degli estratti di nematocisti da Chrysaora Plocamia (Cnidary, Scyhozoa)

Primi risultati sulle caratteristiche qualitative e attività biologica degli estratti di nematocistici di Chrysaora Plocamia (Cnidary, Scyhozoa)

Marco A. Vega & Juan P. Ogalde

Dipartimento di Scienze di base, Universidad Santo Tomás Heroes of Concepción 2885, Iquique, Cile.

Indirizzo per corrispondenza

Abstract. Ci assicuriamo caratterizzazioni qualitative e quantitative dell’attività biologica degli estratti di nematocisti da 30 esemplari di Chrysaora Plocamia raccolti da Huayquique, Iquique, Cile. Dopo aver estratto i nematocisti dalle tentacoli della medusa, li abbiamo caratterizzati con gli spaziatori UV e IR e ha determinato la loro attività biologica attraverso l’analisi antiossidante ed emolitica. I risultati preliminari suggeriscono che le aminoacidi molecolari estratte originarie di proteine, con attività antiadiadico di circa il 65% come condivisione con un antiossidante di origini commerciali e un’attività emolitica molto bassa.

Parole chiave: meduse, nematocisti, bioaattività , Antiossidante, emolisi.

Riepilogo. È caratterizzato qualitativamente e quantitativamente l’attività biologica degli estratti di nematociti di 30 copie di Chrysaora Plocamia raccolti dalla città di Huayquique, Iquique, Cile. Un estratto nematocesico è stato ottenuto dalle braccia della medusa ed è stato caratterizzato da uno sweep nell’intervallo ultravioletto e infrarosso e quindi la sua attività biologica è stata determinata dall’analisi antiossidante ed emolitica. I risultati ottenuti suggeriscono che le molecole dell’estratto potrebbero essere amminoacidi dalla proteina, con attività anti-radicale, circa il 65% rispetto a un antiossidante di origine commerciale e un’attività emolitica piuttosto bassa.

Parole chiave: Meduse, nematocisti, bioattività, antiossidante, emolisi.

Chrysaoraplocamia (Lezione, 1830) è una delle 14 meduse dello Sciolto che abitano nelle acque cilene (Selelfeld, 2002). Questa specie è distribuita in tutto l’Oceano del Pacifico del Sud orientale da Paita al largo del Nord Peru a Punta Arenas al largo del Cile del sud (Lesson, 1830, Vanhoffen, 1888ykfe Kramp, 1961). Le massicce quantità di meduse morte o dei loro resti sono stati trovati lavato a riva di Iquique, specialmente in estate e parte della primavera; I nematocisti che l’uso delle meduse per l’alimentazione e la difesa sono una delle cause più frequenti delle irritazioni della pelle nei nuotatori (Vera et al, 2005). Questa specie non è tossica e causa né moderata né grave avvelenamento negli esseri umani, a differenza della fisiaphysalis, un’altra specie riportata nelle acque cilene le cui tossine producono gravi complicazioni sistemiche (Vera et al, 2005). Tuttavia, il veleno lievemente tossico di C. Plocamia può causare una leggera manifestazione cutanea e oftalmologica entro le prime 24 H e reagisce a lungo termine ritardata in individui che sono stati sensibilizzati attraverso contatti precedenti che provocano una risposta immunitaria (Vera et al, 2005 ).

Sebbene frequentemente osservato nelle zone costiere, ci sono poche informazioni sul c. Biologia Plocamia e persino meno tutto sui suoi nematocisti e la purificazione, la composizione e i meccanismi d’azione del suo Venom, come disponibile per Altre specie congeneriche come C. Quin-QueCirrha o C. Achlyos (Long-Rowe & Burnett, 1994, Faisal et al, 1999, Takatochi et al, 2004). Pertanto, ci siamo eseguiti in caratterizzazione qualitativa preliminare per misurare l’attività biologica degli estratti di nematocisti di 30 c. I campioni di Plocamia raccolti da Huayquique, Iquique, in sacchetti di plastica con immersioni subacquee ad una profondità massima di 35 m di gennaio e febbraio 2007. Ogni esemplare È stato identificato al livello della specie secondo Kramp (1961) e Fagetti (1973), e il diametro campana esterno è stato misurato.

Più tardi, in base alla tecnica modificata di Burnett et al. (1992) e Burnett & Goldner (1970), le tentacole delle meduse sono state estratte e assorbite dal filtro da 0,5 mm. L’estratto risultante è stato refrigerato in fiale etichettato da 25 ml tenuto in contenitori fino alla loro analisi nel laboratorio di Scienze di base dell’Università Santo Tomás, Campus Iquique. Ogni campione è stato quindi centrifugato a 4.000 giri / min per 2 minuti in una centrifuga di Hettich (BOECO-28, Rotore 1624) in un campione 2: 3 ML: soluzione saturata saccarosio; Il decadimento risultante è stato ri-centrifugato per 1 minuto. Il campione è stato quindi sottoposto a agitazione magnetica a freddo (velluta scientifica) per 15-20 minuti a 1200 rpm fino a ottenere l’estratto di nematocisti.La resa dell’estratto del nematocisti e l’apertura sono state stimate contando a 0,2 ml sotto un microscopio leggero. Al fine di caratterizzare qualitativamente l’estratto di nematocisti in saccarosio in termini di amminoacidi e peptidi, uno sweep uv da 250-700 Nm è stato fatto in uno spettrofotometro UV-VIS 1240 shimadzu utilizzando uno spazio vuoto con acqua distillata e un controllo con una soluzione satura satura Una spazzata IR di 700-4000 Nm, con un vuoto saccarosio con acqua distillata. La presenza di proteine è stata confermata qualitativamente nell’estratto di nematocisti sottoportandolo a un test Biuret.

In seguito, l’attività biologica dell’estratto è stata testata, valutando l’attività radical-trapping gratuita attraverso un dosaggio DPPH (difenilpicrylidrazile , Abuin et al., 2002) in triplice confezione. Per questo, 1 ml dell’estratto è stato aggiunto a 2 ml di soluzione DPPH (10 mg DPPH (99%) in 1 L di metanolo, DPPH 10 mg-L-1), che è stato in seguito incubato in un bagno termoregolato per 30 minuti . La sua assorbenza è stata quindi letta a 517 nm utilizzando uno spazio vuoto con metanolo. L’attività antiossidante dell’estratto è stata calcolata come segue: A = 100 (campione di 1-ABS / Riferimento ABS) (Burda et al, 2001). Questa attività è stata confrontata con BHT (idrossicoluene butilata), un antiossidante commerciale frequentemente utilizzato nell’industria alimentare.

L’attività hemolitica dell’estratto è stata dimostrata anche usando il saggio dell’emolisi con erythrocytes umani secondo Zou et al. (2001) e Mayasuki et al. (1987). Per questo, 5 ml di sangue prelevati da un giovane donatore sano che era stato a digiuno per 12 ore sono stati collocati in un destinatario con l’agente anti-coagulazione EDTA. Il plasma è stato eliminato in triplicato centrifugando il campione (3500 giri / min per 5 minuti) e la sospensione dell’erythrocyte è stata lavata con soluzione fisiologica (0,9%) per eliminare il residuo del plasma. Infine, 1 ml della sospensione originale (5 ml di erythrocytes lavato misurati a 250 ml con salina fisiologica dello 0,9%) è stato aggiunto ai diversi volumi dell’estratto fino a raggiungere 3 ml con la soluzione fisiologica. Quindi, questi sono stati incubati a 37 ° C in un bagno termoregolato per 2 ore, centrifugati a 3500 giri / min per 5 minuti, e il supernatante è stato quantificato a 541 nm.

Tutti gli esemplari campionati erano vivi e maturi. I loro diametri di campana fluttuavano tra 130 e 250 mm. La resa dell’estratto del nematocista per esemplare variava dal 75 all’85%, mentre la resa della rottura del nematocisti variava dal 50 al 70% ogni 0,2 ml.

Per quanto riguarda lo spettro della gamma UV, è stato osservato un piccolo picco a 280 Nm insieme a una gamma di analiti che assorbono tra 350 e 700 Nm (figura 1). Gli spazzamenti IR degli estratti hanno rivelato segnali delle fasce più “concentrate” dell’estratto nel Gruppo 1 (2800-3000 Nm), associabile con o-metil unioni o gruppi di formatura di aldeidi; Gruppo 2 (1500-1200 Nm) relativi alle obbligazioni N02, 0-N02 e C-N02; Gruppo 3 (1200-1000 Nm) associati a obbligazioni C-O, C-Oh e C-N, in cui il più probabile è il legame C-O, ma ci sono probabilità medi per le obbligazioni C-N; e Group 4 (1000-700 Nm) relativi alle obbligazioni C-O, O-O, N-O e N02, in cui il più probabile è C-O (figura 2).

La percentuale di attività di intrappolamento radicale libero (figura 3) ha indicato un’attività antiradicolare dell’estratto di nematocisti di circa il 65% rispetto a un antiossidante commerciale utilizzato nell’industria alimentare (BHT), la cui attività è molto più efficace ( 97%). D’altra parte, l’estratto di nematocisti ha mostrato una bassa attività emolitica negli eritrociti umani (figura 4).

L’estratto ha presentato un legame CO nelle sue strutture che avrebbe potuto essere un gruppo di aldeidico o carbonile e un legame CN, azoto che può essere associato a un gruppo Nitro. Queste molecole (ossigenate e / o azotate) danno risultati positivi nel test del Buriet per proteine, corrispondenti al picco 280 Nm nello sweep UV. Ciò suggerisce che le molecole dell’estratto potrebbero essere amminoacidi dalle proteine. La presenza di un componente proteico è anche osservato nelle specie con un maggiore potenziale tossico (Vera et al, 2004, 2005). D’altra parte, la gamma di analiti assorbita tra 350 e 700 Nm suggerisce un effetto della concentrazione del saccarosio dato il maggiore assorbimento dell’estratto.

Data l’attività antiossidante dell’estratto, può esserlo dedotto Ciò sarebbe probabilmente dovuto alla presenza di proteine contenenti gruppi aromatici. La presenza di un componente proteico è anche osservato nelle specie con maggiore potenziale tossico (Vera et al, 2004).

L’attività emolitica della tossina è stata dimostrata in altre specie cogeneriche (C. Quinquecirrha e C. Achlyos) ed è stato letale e / o molto sensibile nei ratti. Il suo potenziale è risultato essere diverso quando si confronta la tossina in entrambe le specie, essendo inferiore per C. Achlyos (Long-Rowe & Burnett, 1994; Faisal et al, 1999).Questa specie è stata anche trovata letale in altri tessuti del diamante killefish (Adinia Xenica) (Takatochi et al, 2004). Tuttavia, per C. Plocamia, i componenti molecolari testati nell’estratto della nematocisti mostrano un’attività emolitica bassa e quasi nullo. Pertanto, possiamo concludere che hanno una bassa tossicità, almeno negli eritrociti umani. Ciò potrebbe generalmente spiegare il loro ridotto effetto cutaneo e dermatologico rispetto ad altre specie (Vera et al., 2005). Nonostante questi primi risultati, è necessario eseguire nuovi studi molecolari al fine di determinare la struttura delle proteine presenti nell’estratto di nematocisti, per testare l’emo-lisi in altre specie e per determinare le future applicazioni antiossidanti dell’estratto.

Riconoscimenti

Gli autori ringraziano la Dirección de Investigación Y Postgrado (Consiglio di ricerca e post-laurea) dell’Universidad Santo Tomás per il finanziamento di questa ricerca.

Abuin, E. , E. LISSI, P. ORTIZ & C. Henriquez. 2002. Reazione di acido urico con i radicali DPPH nell’interfaccia MICELLAR. Bol. Soc. CHIL. Quím., 47 (2): 145-149.

Burda, S., W. Oleszek & J. Agric. 2001. Antioxidant un’attività antiradica di flavonoidi. Food Chem., 49: 2774-2779.

Burnett, J.W. & R. Goldner. 1970. Purificazione parziale dell’ortica marina (Chrysaora Quinquecirrha) Tossina Nematocisti. Proc. Soc. EXO. Biol. Med., 133: 978-981.

burnETT, J.W., K. LUNGO & H.M. Rubinstein. 1992. Preparazione sulla spiaggia di tentacoli nematocisti di meduse. Tossicon, 30 (7): 794-796.

Fagetti, E. 1973. Medusas de Aguas Chilenas. Rev. Biol. Mar., Valparaiso, 15 (1): 31-75.

faisal, r, la. Gershwin & j.w. Burnett. 2000. Studi tossinologici sulla nematocisti veleno di Chrysaora Achlyos. Tossicon, 38 (11): 1581-1591.

Kramp, P. 1961. Sinossi delle medusee del mondo. J. Mar. Biol. Assoc. U.K., 40: 1-469.

Long-Rowe, K.O. & J.W. Burnett. 1994. Negozio Sea (Chrysaora Quinquecirrha) Fattore letale: purificazione riciclando su perline acriliche di acido boronico m-aminofenilil. Tossicon, 32 (4): 467-478.

Mayasuki, M., T. Hiroshi, M. Makoto, Yorihiro & N. Etsuo. 1987. Ossidazione a catena radicale del ratto dei globuli rossi di ratto mediante ossigeno molecolare e la sua inibizione di ALFA-TOCopherolo. Arco. Biochem. Biofani., 258: 373-380.

SIELFELD, W. 2002. Phylum CoelENTERATA: CLASS SCYPHOZOA. Guías de Identificación Y Biodiversidad Fauna Chilena. Apuntes de Zoología, Universidad Arturo Prat, Iquique, Cile, 4 PP.

Takatoshi, I., I. Vucenik, a. Shamsuddin, F. Niculescu & J.W. Burnett. 2004. Due nuove azioni di Nettle Sea (Chrysaora Quinquecirrha) Nematocisti Venom: Studi sul meccanismo delle azioni sull’attivazione del complemento e sul sistema nervoso centrale. Tossicon, 44 (8): 895-899.

vera, c.k., M. Kolbach, M.S. Zegpi, F. Vera & J.R Lonza. 2004. Picaduras de Medusas: Actualización. Rev. Méd. Cile, 132: 233-241.

vera, c.k., M. Kolbach, M.S. Zegpi, F. Vera & J.R Lonza. 2005. Medusas en Cile: un Propóito de Un Caso. Rev. Chil. Dermatol., 21 (2): 96-101.

Zou, C. G., S.A. NIHAL & L.J. Graham. 2001. Insulto ossidativo ai globuli rossi umani indotti dall’iniziatore radicale libero AAF e dalla sua inibizione da una miscela antiossidante commerciale. Vita SCI., 69: 75-86.

ricevuto: 10 luglio 2007; Accettato: 16 ottobre 2007.

Lascia un commento

Il tuo indirizzo email non sarà pubblicato. I campi obbligatori sono contrassegnati *