Marzo 11, 2021

Primeiros resultados sobre as características cualitativas e actividade biolóxica dos extractos de nematocitos da plochsaora Plotamia (CNIDARY, SCYPHOZOA)

lat. AM. J. AQUAT. Res., 36 (1): 83-86, 2008
Doi: 10.3856 / Vol36-issuel-FUTTEXT-6

COMUNICACIÓN CURTURA

Primeiros resultados en características cualitativas e biolóxicas actividade de nematocisto extractos de Chrysaora Plocamia (CNIDARY, Scyphozoa)

os primeiros resultados sobre as características cualitativas e actividade biolóxica de extractos de Nematocystic Chrysaora Plocamia (CNIDARY, Scyphozoa)

Marco A. Veiga & JUAN P. OGALDE

Departamento de Ciencias Básicas, Universidade Santo Tomás Heroes de Concepción 2885, Iquique, Chile.

Enderezo de correspondencia

Resumen. Temos caracterizacións cualitativas e cuantitativas da actividade biolóxica dos extractos de Nematocyst a partir de 30 exemplares de Chrysaora Plocamia recollidos fóra de Huayquique, Iquique, Chile. Despois de extraer os nematocistos dos tentáculos de medusas, caracterizáronos con UV e IR varrer e determinaron a súa actividade biolóxica a través da análise antioxidante e hemolítica. Os resultados preliminares suxiren que o extracto molecular ser aminoácidos que se orixinan en proteínas, con actividade antiadical de preto do 65% como parte cun antioxidante de orixes comerciais e actividade hemolítica moi baixa.

Palabras clave: medusas, nematocyst, bioAactividade , Antioxidante, hemólise.

Resumo. Caracterízase cualitativamente e cuantitativamente a actividade biolóxica dos extractos de Nematocyte de 30 copias de Chrysaora Plocamia recollidas desde a cidade de Huayquique, Iquique, Chile. Un extracto nematocistico foi obtido a partir dos brazos da medusa e caracterizouse por un varrido na gama ultravioleta e infravermella e entón a súa actividade biolóxica foi determinada pola análise antioxidante e hemolítica. Os resultados obtidos suxiren que as moléculas do extracto poden ser aminoácidos de proteínas, con actividade anti-radical, preto do 65% en comparación con un antioxidante de orixe comercial e unha actividade hemolítica bastante baixa.

Palabras clave: Medusa, nematocyst, bioactividade, antioxidante, hemólise.

Chrysaoraplocamia (Lección, 1830) é unha das 14 medusas de Scyphozoan que habita augas chilenas (Sielfeld, 2002). Esta especie distribúese ao longo do Océano Pacífico do Pacífico oriental de Paita do norte de Perú a Punta Arenas do sur de Chile (Lección, 1830, Vanhoffen, 1888YKFE Kramp, 1961). As cantidades masivas de medusas mortas ou os seus restos foron atopados lavados en terra de Iquique, especialmente no verán e parte da primavera; Os nematocistos que a medusa utilizan para a alimentación e defensa son unha das causas máis frecuentes das irritacións da pel nos nadadores (Vera et al, 2005). Esta especie non é tóxica e causível nin envenenamento moderado nin grave nos seres humanos, a diferenza da físicaphysalis, outra especie informada nas augas chilenas cuxas toxinas producen complicacións sistémicas severas (Vera et al, 2005). Con todo, o veleno levemente tóxicas de C. Plocamia pode causar lixeiras cutáneas e privada Manifestacións nas primeiras 24 horas, e atrasou a Longo Prazo reacciona de individuos que foron sensibilizados través anteriores Axenda Iso resultará unha resposta inmune (Vera et al, 2005 ).

Aínda que frecuentemente observado nas zonas costeiras, hai pouca información sobre a Bioloxía da Ploquamia e, aínda que menos sobre os seus nematocistos e a purificación, composición e mecanismos de acción do seu veneno, como está dispoñible para Outras especies conxénicas como C. Quin-Quecerrha ou C. Achlyos (Long-Rowe & Burnett, 1994, Faisal et al, 1999, Takatochi et al, 2004). Polo tanto, realizamos a caracterización cualitativa preliminar para medir a actividade biolóxica dos extractos de Nematocyst de 30 C. Os especímenes de Ploquamia recollidos fóra de Huayquique, Iquique, en bolsas de plástico con mergullo a unha profundidade máxima de 35 m en xaneiro e febreiro de 2007. Cada espécime Foi identificado ao nivel das especies segundo Kramp (1961) e Fagetti (1973), e medíase a campá externa.

Máis tarde, baseado na técnica modificada de Burnett et al. (1992) e Burnett & Goldner (1970), os tentáculos de medusa foron extraídos e empapados en filtro de 0,5 mm. O extracto resultante foi refrixerado en frascos de 25 ml etiquetados en recipientes ata a súa análise no Laboratorio de Ciencias Básicas da Universidade Santo Tomás, Iquique Campus. Cada mostra foi entón centrífuga en 4.000 rpm por 2 min nunha centrífuga de Hettich (Boeco-28, Rotor 1624) nunha mostra de 2: 3 ml: solución de sacarosa de SUMATARADA; A decadencia resultante foi re-centrifugada por 1 min. A mostra foi entón sometida a unha axitación magnética fría (Velp Scientificies) por 15-20 min a 1200 rpm ata obter o extracto de Nematocyst.O rendemento e apertura do extracto de nematocyst estímase contar con 0,2 ml baixo un microscopio lixeiro. Para caracterizar cualitativamente o extracto de nematocyst en sacarosa en termos de aminoácidos e péptidos, un barrido UV de 250-700 NM foi feito nun espectrofotómetro de 1240 UV de Shimadzu usando un espazo en branco con auga destilada e un control cunha solución de sacarosa saturada e Un barrido IR de 700-4000 Nm, cunha sacarosa en branco con auga destilada. A presenza de proteínas foi confirmada cualitativamente no extracto do nematocyst suxeitándolo a unha proba de biuret.

despois, a actividade biolóxica do extracto foi probada, evaluando a actividade de captura de radicais libres a través dun DPPH Assay (difenylpicrylhydrazyl) , Abuin et al., 2002) en triplicado. Para iso, 1 ml do extracto foi engadido a 2 ml de solución DPPH (10 mg DPPH (99%) en 1 L de metanol, DPPH 10 MG-L-1), que foi posteriormente incubado nun baño termoregulado durante 30 minutos .. A súa absorción foi entón lida a 517 Nm usando un espazo en branco con metanol. A actividade antioxidante do extracto foi calculada do seguinte xeito: A = 100 (Referencia de mostra / ABS 1-ABS) (Burda et al, 2001). Esta actividade foi comparada con BHT (hidroxitolueno butilado), un antioxidante comercial usado frecuentemente na industria alimentaria.

A actividade hemolítica do extracto tamén foi probada usando o ensaio de hemólise con eritrocitos humanos segundo Zou et al. (2001) e Mayasuki et al. (1987). Para iso, 5 ml de sangue tomado dun donante novo e saudable que fora o xaxún por 12 horas foron colocados nun destinatario co axente anti-coagulante EDTA. O plasma foi eliminado en triplicado por centrificar a mostra (3500 rpm por 5 minutos) e a suspensión de eritrocito foi lavada con salina fisiolóxica (0,9%) para eliminar o residuo de plasma. Finalmente, 1 ml da suspensión orixinal (5 ml de eritrocitos lavados) engadiuse a 250 ml con salina fisiolóxico do 0,9%) engadiuse aos diferentes volumes do extracto ata alcanzar os 3 ml coa solución fisiolóxica. Entón, estes foron incubados a 37 ° C nun baño termoregulado durante 2 h, centrífugo en 3500 rpm por 5 minutos e o sobrenadante foi cuantificado a 541 Nm.

Todos os especímenes mostrados estaban vivos e maduros. Os seus diámetros de campá fluctuaron entre 130 e 250 mm. O rendemento do extracto de nematocyst por espécime varía de 75 a 85%, mentres que o rendemento de ruptura de Nematocyst varía de 50 a 70% cada 0,2 ml.

No que se refire ao espectro de gama UV, observouse un pequeno pico en 280 nm xunto cunha gama de analitos que absorbían entre 350 e 700 Nm (Fig. 1). Os IR Sweeps of The Extracts revelaron sinais das bandas máis “concentradas” do extracto no Grupo 1 (2800-3000 Nm), asociable con sindicatos O-Methyl ou Aldehyde formando grupos O; GRUPO 2 (1500-1200 NM) relacionado con títulos N02, 0-N02 e C-N02; grupo 3 (1200-1000 nm) asociado con conexións C-O, C-OH, e C-N, en que o máis probable é a conexión C-O, pero hai probabilidades medios para conexións C-N; e Grupo 4 (1000-700 Nm) relacionados cos enlaces C-O, O-O, N-O e N02, en que o máis probable é C-O (Fig. 2).

A porcentaxe da actividade de captura de radicais libres (Fig. 3) indicou unha actividade antiródica do extracto de Nematocyst de aproximadamente o 65% en comparación con un antioxidante comercial usado na industria alimentaria (BHT), cuxa actividade é moito máis efectiva ( 97%). Doutra banda, o extracto do nematocyst mostrou unha baixa actividade hemolítica nos eritrocitos humanos (Fig. 4).

O extracto presentou un enlace de CO nas súas estruturas que podería ser un grupo aldehído ou carbonilo e un bono de CN, nitróxeno que pode asociarse cun grupo de nitro. Estas moléculas (oxigenadas e / ou nitrogenadas) dan resultados positivos na proba de Buriet para proteínas, correspondentes ao pico de 280 Nm no barrido UV. Isto suxire que as moléculas do extracto poden ser aminoácidos das proteínas. A presenza dun compoñente proteico tamén se observa en especies con maior potencial tóxico (Vera et al, 2004, 2005). Por outra banda, o rango de analitos absorbidos entre 350 e 700 Nm suxire un efecto da concentración de sacarosa dada a maior absorción do extracto.

Dada a actividade antioxidante do extracto, pódese deducir que Isto probablemente sería debido á presenza de proteínas que conteñan grupos aromáticos. A presenza dun compoñente proteico tamén se observa en especies con maior potencial tóxico (VERA et al, 2004).

A actividade hemolítica da toxina foi probada noutras especies cogenéricas (C. Quinquecirrha e C. achyos) e foi letal e / ou moi sensible nas ratas. O seu potencial atopouse que era diferente ao comparar a toxina en ambas as especies, sendo inferior a C. AchLyos (Long-rowe & Burnett, 1994; Faisal et al, 1999).Esta especie tamén se atopou a ser letal noutros tecidos do diamante Killifish (Adinia Xenica) (Takatochi et al, 2004). Non obstante, para C. Plocamia, os compoñentes moleculares probados no extracto de Nematocyst mostran unha actividade hemolítica baixa e case nula. Polo tanto, podemos concluír que teñen baixa toxicidade, polo menos en eritrocitos humanos. Isto xeralmente podería explicar a súa diminución do efecto cutáneo e dermatolóxico en comparación con outras especies (Vera et al., 2005). A pesar destes primeiros resultados, é necesario realizar novos estudos moleculares para determinar a estrutura das proteínas presentes no extracto de Nematocyst, probar a hemo-lise noutras especies e determinar as futuras aplicacións antioxidantes do extracto.

Recoñecementos

Os autores agradecen a Dirección de Investigación e Postgrado (Consello de Investigación e Posgrao) da Universidade Santo Tomás para financiar esta investigación.

Abuin, E. , E. Lissi, P. Ortiz & C. Henriquez. 2002. Reacción de ácido úrico con radicais DPPH na interface micelar. Bol. Soc. Chil. QUÍ., 47 (2): 145-149.

Burda, S., W. Oleszek & J. Agric. 2001. Antioxidante unha actividade antiradical de flavonoides. Comida química., 49: 2774-2779.

Burnett, j.w. & R. Goldner. 1970. Purificación parcial de Nettle Sea (Chrysaora Quinquecirrha) Nematocyst Toxin. Proc. Soc. EXO. BIOL. Med., 133: 978-981.

Burnett, j.w., K. Long & H.m. Rubinstein. 1992. Preparación de praia de medusas tentáculos de nematocyst. Toxicon, 30 (7): 794-796.

Fagetti, E. 1973. Medusas de Aguas Chilenas. Rev. Biol. Mar., Valparaíso, 15 (1): 31-75.

faisal, r, la. Gershwin & j.w. Burnett. 2000. Estudos toxinolóxicos sobre o Venomo Nematocyst de Chrysaora Achnosos. Toxicon, 38 (11): 1581-1591.

Kramp, P. 1961. Sinopse da Medusae do Mundo. J. Mar. Biol. Oc. U.K., 40: 1-469.

Long-rowe, k.o. & j.w. Burnett. 1994. Nettle Sea (Chrysaora Quinquecirrha) Factor letal: Purificación por reciclaxe en contas de acrílico de ácido borónico m-aminofenilo. Toxicon, 32 (4): 467-478.

Mayasuki, M., T. Hiroshi, M. Makoto, Yorihiro & N. etsuo. 1987. Oxidación de cadea radical libre de glóbulos vermellos de rata por osíxeno molecular e a súa inhibición por Alfa-tocoferol. Arco. Biochem. Biophys., 258: 373-380.

Sielfeld, W. 2002. Phylum Coelenterata: Clase Scyphozoa. Guías de Identificación e Biodiversidade Fauna Chilena. Apuntes de Zooloxía, Universidade Arturo Prat, Iquique, Chile, 4 pp.

Takatoshi, I., i. Vucenik, a. Shamsuddin, F. niculescu & j.w. Burnett. 2004. Dúas novas accións de Nettle Sea (Chrysaora Quinquecirrha) Nematocyst Venom: Estudos sobre o mecanismo de accións sobre a activación do complemento e no sistema nervioso central. Toxicon, 44 (8): 895-899.

Vera, C.K., M. KOLBACH, M.S. ZEGPI, F. VERA & J.R LONZA. 2004. Picaduras de Medusas: Actualización. Rev. Méd. Chile, 132: 233-241.

Vera, C.K., M. KOLBACH, M.S. ZEGPI, F. VERA & J.R LONZA. 2005. Medusas en Chile: Un propósito da ONU CASO. Rev. Chil. Dermatol., 21 (2): 96-101.

Zou, C. G., S.A. Nihal & l.j. graham. 2001. Insulto oxidativo aos glóbulos vermellos humanos inducido polo Iniciador Radical libre Aaf ea súa inhibición dunha mestura antioxidante comercial. Vida Sci., 69: 75-86.

Recibido: 10 de xullo de 2007; Aceptado: 16 de outubro de 2007.

Deixa unha resposta

O teu enderezo electrónico non se publicará Os campos obrigatorios están marcados con *